22888840
0
Western Blot

ایمنوبلات پروتئین که از آن به عنوان “وسترن بلاتینگ” نیز یاد می شود روشی آزمایشگاهی است که می توان از طریق آن به تشخیص مولکول های خاص پروتئینی در مجموعه ای از پروتئین ها پرداخت. در واقع این روش متمرکز بر پروتئین ها است. از این روش آزمایشگاهی بیشتر در زیست شناسی سلولی و مولکولی استفاده می شود. با این روش می توان تحقیقات ایمنی زایی را نیز توسعه و گسترش داد. در این مقاله به شما خواهیم گفت “وسترن بلاتینگ ( Western Blot) چیست؟” و در ادامه با مزیت‌های آن آشنا خواهیم شد.

تاریخچه تکنیک وسترن بلات

تکنیک وسترن بلات

پیشینه وسترن بلات به سال 1970 برمی گردد. زمانی که توبین و همکاران وی موفق به جداسازی پروتئین ها با ژل پلی آکریل آمید شدند و آن را در نهایت توانستند به غشای نیتروسلولز منتقل کنند. فرایند این روش آزمایشگاهی بعدها توسط بورنت پیشرفته تر شود. و توانست روش جداسازی از پروتئین از ژل پلی آکریل آمید را به گونه ای انجام دهد، که در نهایت منجر به تکنیک وسترن بلات شد. به بیان بهتر می توان گفت وسترن بلات روش تکامل یافته تکنیک ساترن بلات است که از آن برای تشخیص و شناسایی قطعات DNA استفاده می شود.

دلایل و کاربرد استفاده از Western Blot

تست وسترن بلات یکی از تست های آزمایشگاهی است که به کمک آن می توان به توسعه سلامت و تشخیص عوامل بیماری زا و خطرناک کمک کرد. در چنین شرایطی می توان انواع روش های آزمایشگاهی مفید را نام برد که هر کدام کارایی خود را دارد. اما ادلایل و کاربردهای تست وسترن بلات آن را در مقایسه با دیگر روش ها متمایز می کند. در ادامه به مهمترین دلایل و کاربردهای این تست آزمایشگاهی اشاره می شود:

دلایل

شاید برای شما سوال باشد که دلیل استفاده از این تست چیست؟ در پاسخ به این سوال می توان به دلایل زیر اشاره کرد:

  • تحقیق و توسعه تولید داروها
  • تحقیقات و پژوهش های پزشکی
  • تشخیص و درمان
  • شناسایی و اندازه گیری بیان پروتئین در بافت
  • مورد استفاده در آزمایشگاه های سلولی مولکولی، علوم و اعصاب، سیتوژنتیک و…
  • موثر در نتایج کیفی محتوای پروتئین های هدف در نمونه های سلولی و بافتی
  • موثر در نتایج بیان پروتئین ها
  • تشخیص بیماری ها
  • شناسایی پروتئین های آلرژی زا در نمونه های غذایی

کاربردها

استفاده از این روش تحقیقاتی و پژوهشی بسیار گسترده است. مهمترین از آن ها استفاده پزشکی، دارویی و صنعتی می باشد. در حال حاضر از مهمترین کاربردهای وسترن بلات که در زمینه بیوشیمی، پزشکی، دارویی و زیست سلولی مولکولی از آن استفاده می شود می توان به موارد زیر اشاره کرد:

  • تست تشخیص بیماری ها با کیت اندوتوکسین
  • تشخیص آنتی بادی ضد HIV در آزمایش تایید شده ایدز
  • آزمایش قطعی برای بیماری پریون به دلیل مصرف گوشت گاو آلوده به آنسفالوپاتی اسفنجی گایو
  • تشخیص تولارمی
  • آزمایشات بیماری لایم
  • آزمایش تایی کننده عفونت هپاتیت B
  • آزمایش تایید عفونت HSV-2 (تبخال نوع 2)
  • تست تشخیص دوپینگ در آژانس جهانی مبارزه با دوپینگ
  • تشخیص سرطان خون

بیشتر بدانید : کیت آزمایشگاهی چیست؟ کاربرد و انواع آن

نکات مهم در انجام آزمایش وسترن بلاتینگ

زمانی که می خواهید تست وسترن بلات را انجام دهید، رعایت و توجه به نکات زیر مهم است:

نکات مهم در انجام آزمایش وسترن بلاتینگ

خطایابی و حل مشکلات به وجود آمده

شما باید در زمان انجام این آزمایش به این مسئله توجه کافی را داشته باشید تا میزان ضریب خطا تا حد زیادی کاهش پیدا کند.

توجه به مواد شیمیایی آزمایشگاهی

این مواد و دستگاه هایی که در مسیر تست وسترن بلات استفاده می شود باید دارای استانداردهای لازم باشد. برای این منظور می توان از رفرنس استاندارد دارویی استفاده کرد.

انجام دقیق گام به گام تست وسترن بلات

زمانی که برای انجام این تست اقدام می کنید، انجام مراحل به شکل دقیق و اصولی تاثیر مستقیم بر نتایج تست دارد.

مراحل تست وسترن بلاتینگ

جالب است بدانید که تست وسترن بلا دارای دوره ها و مراحل مختلفی است که در ادامه به مهمترین آن ها اشاره می شود:

مراحل تست وسترن بلاتینگ

  • تهیه نمونه: در این مرحله که نخستین گام در تست وسترن بلات است باید نمونه دارای پروتئین مورد نظر اماده سازی شود. این نمونه می تواند از بافت حیوانی یا گیاهی، سلول های کشت شده و… باشد.
  • استخراج پروتئین ها: از آنجا که تست وسترن بلات متمرکز بر تشخیص و بررسی پروتئین ها است، در این مرحله باید پروتئین های مورد نظر از نمونه استخراج شود. برای این کار از انواع مواد شیمیایی مانند اره، بافرهای لیزیس،ريال بافرهای آبی و.. استفاده می شود.
  • الکتروفورز پروتئین ها: پس از آنکه موفق به استخراج پروتئین ها از نمونه شدید، نوبت به الکتروفورز ان در ژل آگارز ژله ای است.
    انتقال پروتئین ها به سطح ممبران: پروتئین هایی که الکتروفورز شده، به ممبران های تهیه شده از نایلون یا PVDF منتقل می شود.
  • تعامل پروتئین ها با آنتی بادی ها: پس از آنکه پروتئین ها به ممبران منتقل شده، آنتی بادی به مولفه های مورد نظر متصل می شود تا به شکل کمپلکس در بیاید.
  • شستشو: آنتی بادی ها پس از تعامل با پروتئین ها، با شستشوی ممبران رنگ می گیرند تا پروتئین های اضافه حذف شوند.
  • تشخیص: آنتی بادی های تعیین شده پس از شستشو رنگ می گیرد که قابل تشخیص هستند.
    تجزیه و تحلیل» نتایج مورد نظر با استفاده از لوازم تصویربرداری مشخص می شوند.

نتیجه گیری

استفاده از روش های تحقیقاتی مانند وسترن بلات به کمک کیت آزمایشگاهی و نیز انواع مواد شیمیایی آزمایشگاهی انجام می شود. از آنجا که زمینه تخصصی این روش تحقیقاتی نیازمند اقلام و دستگاه آزمایشگاهی استاندارد است، از همین رو در تهیه آن باید نهایت دقت صورت بگیرد. شرکت بازرگانی آرین پژوه عرضه کننده و واردکننده انواع تجهیزات و لوازم آزمایشگاهی از برندهای معتبر و استاندارد خارجی است، که می توانید برای خرید از آن اقدام کنید.

در حال حاضر بسیاری از برندهای معروف آزمایشگاهی و تحقیقاتی کشور مانند انستیتو پاستور ایران، دانشگاه های علوم پزشکی تهران و شهید بهشتی، مرکز تحقیقات رویان و… اقلام آزمایشگاهی و کیت های تشخیصی مانند کیت اندوسیف و… را از طریق این شرکت تهیه می کنند. داشتن نمایندگی انحصاری برخی از برندهای معروف جهانی و نیز تضمین اصالت و کیفیت محصولات عرضه شده از مهمترین ویژگی های این شرکت است.